食用色素，是色素的一种，即能被人适量食用的可使食物在一定程度上改变原有颜色的食品添加剂，又称食用染料和着色剂，分为天然和人工合成两种，合成着色剂因色泽鲜艳，着色力强、稳定性好、价格低廉等特点而被广泛使用。靛蓝是食品生产中常用的合成着色剂之一，关于靛蓝的分析测试，有实验员反馈回收率做不好，时高时低，事实真是这样吗，我们一起来揭秘真相！ 
本文所指的靛蓝，CAS：860-22-0。因许多着色剂中文俗称一样，在选择标准品的时候容易弄错，比如CAS：860-22-0与CAS：482-89-3的着色剂，生活中习惯均称之为靛蓝，但两者结构式是不一样的，CAS：860-22-0的靛蓝可以溶于水，而CAS：482-89-3的靛蓝不溶于水。 
 
CAS：860-22-0 
 
CAS：482-89-3 
实验部分 
SPE 
小柱：聚酰胺小柱500mg/6mL 
活化：5mL甲醇 
平衡：5mL 水 
上样：5mL 1ppm靛蓝标准品，溶剂柠檬酸溶液（pH 3.0~4.0） 
淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去离子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液。 
洗脱：3mL*2 10%氨水甲醇 
收集洗脱液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸铵溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上机分析。 
仪器条件 
色谱柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um） 
流动相：A:甲醇  B：乙酸铵(0.02mol/L) 
梯度洗脱：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A 
流速：1.0mL/min 
柱温：25℃ 
波长：254nm 
进样量：10uL 
实验结果 
靛蓝的加标回收率在60~100%，不同实验时间、不同实验员测试的结果不尽相同。 


原因分析 
那么到底是什么原因导致靛蓝回收率不稳定呢，我们从以下方面进行了分析。 
1 SPE方法 
分布收集SPE上样、淋洗溶液均未检测到靛蓝，对洗脱后的聚酰胺小柱做第二次洗脱，也未检测到目标物； 
降低SPE小柱上样溶液的浓度至原来的1/5,并重复分布收集过程，洗脱液中靛蓝的回收率依然不稳定，忽高忽低； 
换用不同材质的容器，塑料容器和玻璃容器收集过柱溶液，排查盛放过柱溶液的容器是否吸附靛蓝，结果并无差异。 
经过对SPE方法的分析，回收率有时候可以达到90%以上，可见SPE方法没有问题。 
2 标准品存放条件 
配置500ppm/水的靛蓝标准储备溶液，室温存放一段时间，肉眼观察其变化情况。可见刚配置好溶液为蓝色，然后颜色不断变化，放置三周后溶液变成黄色并一直保持这个颜色，可见靛蓝水溶液在室温存放稳定性不好，分析导致其变质的原因可能有温度、时间、光照、氧气等因素。 
 
图1  500ppm靛蓝水溶液 
将500ppm/水的靛蓝标准储备溶液配置后4℃保存，在不同的时间取样，加水溶解稀释成5ppm的溶液后，立即上机测试，并与新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝、赤藓红B其他7种着色剂做对照，7种着色剂的处理方法与靛蓝相同。8种着色剂峰面积测试结果见表1。由此可见，除了靛蓝之外，其他7种着色剂在相同的保存条件下含量均无变化，而靛蓝储备溶液4℃保存时，随着保存时间的延长，会不断降解，一个月后有效成分只有最初的66%。即使是同时配置的靛蓝溶液，光照4h后，有效成分也只有最初的83%，光照11h后，有效成分只有最初的63%。 
 
实验方法改进 
每次实验均取固体靛蓝标品，现用现配，在整个实验过程中避光操作，实验前处理时间控制在1天之内，样品处理完后，立即上机测试，结果靛蓝的回收率可以达到90~95%，RSD<5%。 
小编建议 
靛蓝（CAS:860-22-0）性质很不稳定，不耐光和热，实验中靛蓝回收率忽高忽低不稳定的原因主要是靛蓝标准品发生了降解或者样品中的靛蓝在前处理过程中降解，为了避免靛蓝的损失，每次实验需要用固体的靛蓝标品，现用现配，实验用到的标品包括上机的和加标的，需要同时配置好并在相同的条件下保存，在整个实验过程中避光操作，合理安排前处理时间，尽可能快的完成前处理，样品处理完后，立即上机测试。