Pirkle系列手性色谱柱

手性化合物分析方法开发

适用于Pirkle型固定相手性柱的筛选

第一步：色谱柱的选择

我们建议首先选用下列色谱柱进行方法开发。在Regis公司进行方法开发的时候，我们首选Whelk-O系列的色谱柱，因为该系列色谱柱具有广泛的适用范围。

选择顺序：

1.Whelk-O   2.ULMO   3.DACH-DNB   4.α-Burke   5.β-Gem   6.Pirkle 1-J   7.Leucine   8.Phenylglycine

第二步：流动相的选择

在方法开发时，样品的溶解度和准备工作的难易程度，都是决定选用反相流动相还是正相流动相的考虑因素。Pirkle-Type系列同时适用于两种模式，但通常在正相色谱条件下更好。因为大多数手性化合物的分析方法都会运用到制备分离上，我们建议选用正相溶剂。

典型的流动相组合：

己烷/异丙醇  己烷/乙醇  己烷/二氯甲烷/水  己烷/乙酸乙酯  庚烷/乙醇  庚烷/二氯甲烷  正己烷/二氯甲烷  庚烷/异丙醇  甲醇/水  乙醇/水  乙腈/水  甲醇/二氯甲烷  四氢呋喃/水  乙醇/二氯甲烷

第三步：从高浓度（~50%）的强溶剂（乙醇、异丙醇等）开始试验

从强溶剂的色谱系统开始试验，能够使所有的物质快速的从色谱柱中洗脱出来

● 如果你达到上述任意一个分离度（像右图样品），请进入第四步；
● 如果样品没有保留，将强溶剂减半；
● 如果样品峰在溶剂峰之外，并且达到分离度，请进入第四步；
● 如果你的样品峰在溶剂峰之外，但没有分离度，请更换色谱柱。

第四步：添加流动相修饰剂（Modifier）（通常~0.1%）

如果发现最开始达到分离的峰峰形较差，通常加入修饰剂来解决这一问题。如果你已经对峰形较满意，那么则不需要添加修饰剂，直接进入第五步，开始优化分离度。

● 对于常见的或含胺基的化合物-添加三乙胺、二乙胺或醋酸铵；
● 对于含酸性基团的化合物-添加乙酸、三氟乙酸或醋酸铵；
 

 

 

 

● 尽管在流动相中加入了0.1%的三乙胺后分离度已经有所提高，但峰形仍较差；
● 尝试更换不同的修饰剂；

● 添加0.1%的乙酸后，分离度和峰形都较好。。

回顾前四步

对于这个样品，如果你只是想寻找一个基本的方法，那么你可以选择含0.1%乙酸的（50/50）（己烷/乙醇）溶液作为流动相，进入第5步进行条件优化。

第五步：方法优化

优化手性物质的方法与优化非手性物质的方法极为相似。改变流动相比例或者流动相组分，都有可能改变分离度。

增加弱溶剂的浓度：

在这个例子中，增加己烷的含量能够使分离度提高，你可以停留在这步作为优化后的结果或者也可以继续优化。

改变强溶剂：

 

用异丙醇代替乙醇，分离度和α都有所提高。

优化手性化合物的方法可以按照你自己的想法或简单或复杂，可以选用不同的流动相组成，修饰剂可以改变或者取消，你可以更换色谱柱。可能性是无穷的。我们建议越简单越好，一旦获得可接受的分离度，就进行下一步试验，因为在方法开发中，如果分离度和α值仅有一点点提高，那是不值得我们花费时间去完成这一点点提高的。

如果按照上述步骤依然不能实现分离，您可以将样品寄给我们，Regis公司提供免费的手性化合物专业筛选服务，帮助您选型。